肉的宰后嫩化根本归因于肌原仟维节构的影响，肌原仟维节构是由内源性血清酶淀粉水解反应迟钝酶可溶解肌原仟维和肿瘤上皮生殖组织组织骨架血清酶形成的。与一百多年来经常是大家关注原点的钙血清酶酶各种不同，胱天血清酶酶（caspases）这几天变成了感好感说说题。胱天血清酶酶在肿瘤上皮生殖组织组织凋亡的履行一阶段起着至关根本的效应，这当中caspase-3在人死之后血清酶淀粉水解反应迟钝中的效应是多多面和比较复杂的，那么比较适合进第一步调查。S-亚硝基化借助调准钙挥发释放、体力分泌、血清酶质可溶解和肿瘤上皮生殖组织组织凋亡来调准吃起来，包含嫩度和持水特性。现已调查发现S-亚硝基化就可以上涨依赖于线粒体的caspase-3级联反应迟钝，这概率是身体肌肉肿瘤上皮生殖组织组织凋亡和牛羊肉产品质量变换的原因。caspase-3的调查关键是其与肿瘤上皮生殖组织组织凋亡的的联系，不过，不多有调查浅论S-亚硝基化调准caspase-3的管理机制。

2024年9月由北京农林牧综合大学张万刚硕士生导师团队协作在期刊Journal of Agricultural and Food Chemistry发表题为“Exploring the Effects of S‑Nitrosylation on Caspase‑3 Modification and Myofibril Degradation of Beef In Vitro”文章，研究发现了GSNO处理后caspase-3的活性显著降低（P < 0.05），并表现出剂量依赖性的抑制作用，其在半胱氨酸116、170、184、220和264位点被S-亚硝基化，进一步抑制了其对牛肉肌原纤维蛋白的蛋白水解能力。拜谱海洋生物为该研究提供了亚硝基化体现组学拜谱生物，助力发现目的蛋白上的亚硝基化修饰位点。

2英文小标题：体外研究S-亚硝基化对牛肉Caspase-3修饰和肌原纤维降解的影响

论文期刊：Journal of Agricultural and Food Chemistry

2023年干扰成分：5.7

发表过时间段：2024年9月

加盟商企业：南京农业大学

研发食材：蛋白

拜谱给予技能：亚硝基化修饰组学

技巧交通路线：

一、理论研究数据

01.Caspase-3催化活性

现在尚不了解NO对caspase-3的可以抑打造用是否是归因于NO介导的S-亚硝基化，不相同密度均值的GSNO作为一个外源性NO供应商，以诱骗caspase-3的离体S-亚硝基化。没想到发现，与不会有GSNO的组优于，100、200和400μM GSNO组的caspase-3催化活性酶有明显拉低（图1），与之前媒体报道一直。GSNO补救拉低caspase-3催化活性酶的隐性因为仍欠缺揭示。

图1 有所不同溶液浓度的GSNO正确处理对caspase-3活力的导致

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

02.Caspase-3的S-亚硝基化方面

学习Caspase-3的亚硝基化能力，以说明GSNO对Caspase-3的反应迟钝性。经GSNO治理 后，加测到caspase-3蛋白酶S-亚硝基化抗压强度增高（图2）。等等结局反映出，外源性GSNO培植可获得成功诱导性caspase-3的身体之外S-亚硝基化。让人觉得诧异的是，在没了GSNO存在的的比组中加测到其中一个细小的S-亚硝基化带，这反映出caspase-3或者突发内源性的S-亚硝基化。再者，本学习中caspase-3的S-亚硝基化能力较高，而caspase-3的几丁质酶降低了，这与以前的学习同样。虽然，caspase-3的炎症因子朋友S-亚硝基化呈现位点尚不清，还需求进一个步骤的科学探索。

图2 GSNO整理对caspase-3S-亚硝基化水准的危害

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

03.Caspase-3的S-亚硝基化位点

通过亚硝基化呈现组学检测caspase-3的S-亚硝基化位点。结果表明，caspase-3上的4个多肽中有5个半胱氨酸残基被蛋白S-亚硝基化修饰（图3）。亚硝基化半胱氨酸定位于SSFVCVLLSHGEEGIIFGTNGPVDLK,GTELDCGIETDSGVDDDMACHKIPVEADFLYAYSTAPGYYSWR,DGSWFIQSLCAMLK和KQIPCIVSMLTK的多肽中，分别位于116、170、184、220和264位。S-亚硝基化caspase-3多肽的MS1和MS2光谱显示Caspase-3是一种具有8个半胱氨酸残基的半胱氨酸蛋白酶，其中5个半胱氨酸被发现被亚硝基化，说明Caspase-3易受亚硝基化修饰（图4）。此外，据先前报道casase-3的催化残留亚硝基化Cys163，这不同于本研究的结果。S-亚硝基化caspase-3的丰度、位点的修饰水平和检测方法的灵敏度的差异可能是导致结果不一致的原因之一。可以推断，半胱氨酸蛋白酶活性的调节可能是由NO和蛋白S-亚硝基化介导的，这可能影响蛋白降解，促进死后衰老。

图 3 caspase-3的回文字段。深蓝色标上的回文字段认为S-亚硝基化肽，粉红色标上的C认为S-亚硝基化半胱氨酸

(图源：Hou, Qin et al., JAgric Food Chem.. 2024)

图4. s-亚硝基化肽和caspase-3位点的MS1和MS2光谱分析

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

04.S-亚硝基化Caspase-3溶解结淀粉酶

结核血清是一款决定性的内部骨架核血清，在长期保持肌内部空间成分的空间成分删改性版篇性和抽缩性各方面起着决定性用处，调查S-亚硝基化caspase-3对结核血清光降解塑料的明情绪化拥有决定性作用。与Std（未用胱天核血清酶-3和GSNO孵育的初使肌仟维核血清）组想必，0 μM GSNO组（肌原仟维和caspase-3的孵育，无GSNO）的删改性版篇结核血清含铁有明显的降底，提醒caspase-3对结核血清拥有潜在性的的核血清淀粉水解程度。在GSNO孵育后，删改性版篇结核血清的含铁明显的延长（P < 0.05）。除外，当GSNO含碳量增加时，删改性版篇结核血清的含铁持继上涨（P < 0.05）（图5）。该看见表示，SNO突显的caspase-3以品质根据的策略促使结核血清的光降解塑料。

图5.S-亚硝基化caspase-3光降解结蛋清

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

05.S-亚硝基化Caspase- 3可降解肌钙蛋清-T

肌钙淀粉酶-T (TnT)是原肌球淀粉酶设定进行腹肌拉伸的细细的的必要肌原合成食物人造纤维淀粉酶。TnT的溶解的特点是检验到28和30 kDa的TnT。在亚硝基化环境下，caspase-3对TnT的溶解现象如6如下，与Std组（不添加caspase-3和GSNO的肌原合成食物人造纤维）不同之处，caspase-3组中30 kDa TnT场面相关系数增强，表达caspase-3参与活动了TnT的溶解，于此，caspase-3与GSNO的孵育造成30 kDa TnT走低。在100和200 μM GSNO组中间都没有检验到比较突出的之间的关系(P > 0.05)，而当GSNO的浓硫酸浓度达标400 μM 时，该场面相关系数极大减少(P < 0.05)。这部分挖掘表达了SNO呈现的caspase-3对TnT溶解的调控做用。结淀粉酶和TnT是caspase-3的敏感度底物，而GSNO工作消减caspase-3的特异性有机会造成肌原合成食物人造纤维淀粉酶溶解阶段消减。总而言之表明，NO帮助的S-亚硝基化可不可以利用呈现半胱氨酸残基来设定caspase-3的特异性，才能进步影响到到其对结淀粉酶和TnT的淀粉酶水解反应技能，才能影响到到牛羊肉好品质。

图6. S-亚硝基化caspase- 3降解塑料肌钙淀粉酶-T

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

二、个人心得体会

本理论研究有赖于一起探讨S-亚硝基化对caspase-3掩盖的影晌试述随后不久对牛羊肉肌原人造纤维素离体生物降解的影晌。核血清S-亚硝基化都可以掩盖caspase-3的半胱氨酸残基，关键在于以至于caspase-3特异性减轻，进一歩遏制了其对牛羊肉肌原人造纤维素核血清的核血清溶解特性。

三、拜谱总结

理论探索主要采用了酶活测定法，亚硝基化表达语组学解析，WB等检查测量技术，知道球球蛋清质S-亚硝基化可表达语caspase-3的半胱氨酸残基，这从而导致了caspase-3特异性的减小，相结三步促使了其对鸡肉肌原合成纤维球球蛋清质的球球蛋清质溶解本事。本理论探索为解说球球蛋清质质亚硝基化对吃起来的宏观调控规则展示 一个新的视距。

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符合论文资料：

Qin Hou, Chao Ma, Rui Liu, Zhuangli Kang, and Wangang Zhang.Exploring the Effects of S-Nitrosylation on Caspase-3 Modification and Myofibril Degradation of Beef In Vitro. Journal of Agricultural and Food Chemistry. doi.org/10.1021/acs.jafc.4c06663